MATRIZ EXTRACELULAR DESCELULARIZADA CEREBRAL: COMO MODELO IN VITRO DE INGENIERÍA DE TEJIDOS.

La matriz extracelular se define como un andamio que le da apoyo estructural a los tejidos y sirve para mantener el fenotipo celular tejido-específico. Por su alto potencial bioquímico y estructural para apoyar las funciones biológicas de las células, la matriz extracelular de distintos tejidos animales es usada como biomaterial en aplicaciones clínicas para promover la regeneración, después de ser procesada (i.e., “descelularizada”) para remover los componentes celulares que pudieran causar una reacción inmunológica. Sin embargo, su aplicación para la regeneración de tejido nervioso es relativamente inexplorada. En este estudio optimizamos un protocolo de descelularización de matriz extracelular de corteza de cerebro porcino para reducir el tiempo de producción y estudiamos su capacidad de ser usado para modelos celulares in vitro. El protocolo combina técnicas de remoción físicas, químicas y mecánicas a través de congelamiento, baños agitados en detergentes y enzimas por tiempos definidos, que permitan remover los componentes inmunogénicos celulares pero mantengan la integridad de la matriz extracelular. Para caracterizar el nivel de descelularización del tejido cerebral utilizamos técnicas de biología molecular para el análisis de contenido de ADN (Quant-ITTM PicoGreen®, Invitrogen) y tinciones histológicas de hematoxolina/eosina y microscopía de fluorescencia (DAPI). La integridad de la matriz extracelular descelularizada antes y después de ser procesada fue evaluada a través del contenido de proteínas por BCA (PierceTM). La capacidad de recubrir cubreobjetos para cultivos celulares fue evaluada con microscopía de fluorescencia (FM1-43) y cálculos de adsorción de proteínas a la superficie. También se llevaron a cabo cultivos celulares de la línea celular PC12 en cubreobjetos cubiertos con el biomaterial. Nuestras modificaciones al protocolo lograron descelularizar en un 72% la matriz extracelular de cerebro porcino, manteniendo un 84% de las proteínas presentes en el tejido nativo. Finalmente, el biomaterial presentó la capacidad de recubrir superficies y permitir el cultivo celular de células PC12 hasta por 2 semanas, lo cual es un punto crítico para que pueda ser utilizado como sustrato para estudios celulares in vitro.

Dr. Diego Reginensi, INDICASAT AIP

FECHA: 20 de Octubre 2016

HORA: 9:30am

LUGAR: Hotel Wyndham Panamá, Albrook Mall